高德平台游离atp vs细胞内atp

时间:2022-11-23 作者:河南《高德娱乐》 热度:

高德娱乐-Q554258报导: 什么是ATP?

三磷酸腺苷(ATP)是所有活细胞用来为代谢反应提供能量的分子。它通常被称为细胞内能量转移的“分子货币单位”。由于ATP是特定于生存环境的,它的存在证明了生物的存在。

ATP检测是一种在几分钟内测量样品中ATP水平的技术。

有两种形式:

游离或细胞外ATP,

细胞内ATP。

免费的ATP

它是由死亡细胞释放的ATP。当细胞死亡时,它就失去了膜的完整性。ATP是一种非常小的分子,它被释放到环境中。

由于它是一种不稳定的分子,在无缓冲的水中,它会迅速被破坏。它的稳定性取决于许多参数:

pH:游离ATP在中性pH下稳定,但随着碱性和酸性pH的增加其降解速率迅速增加。

温度:降解速率随温度增加而增加。它在4°C下相当稳定,在25-30°C下降解迅速。

稳定剂的存在:如多阳离子和/或一些阳离子。

使用的杀菌剂类型:如氯或溴等氧化型杀菌剂可迅速降解游离ATP,而非氧化型杀菌剂作用甚微。

存在其他微生物:一些能够检索游离的ATP来使用它。

因此,游离ATP的稳定性很难评估,因为它取决于许多参数。事实上,如果环境提供了良好的稳定性,游离的ATP就会积累起来。然而,如果环境不利,游离ATP会很快消失。

细胞内ATP

它是在活细胞中发现的ATP。如上所述,该分子在细胞内能量传递中起着至关重要的作用。它在细胞中被永久更新和循环,但当细胞死亡时,它的生产立即停止。

总ATP被定义为游离ATP和细胞内ATP的总和。为了测量它,有必要用裂解缓冲液破坏细胞,以提取ATP。测量的是游离的细胞内ATP和游离的ATP。

为了评估样品中微生物的数量,只需要测量细胞内ATP。

“总ATP -游离ATP =细胞内ATP”是一种短视和危险的方法…

如何测量细胞内ATP?

为了量化细胞内ATP,已经开发了两种不同的方法:间接测量和直接测量。

间接测量:

这是第一个被开发出来的技术。它基于以下假设:

总游离ATP =细胞内ATP

细胞内ATP是从总ATP和游离ATP的测定中推导出来的。

游离ATP的测定:采用生物发光法,无裂解缓冲液。因此,只有细胞外(游离)ATP能够与生物发光酶反应。然而,如上所述,游离ATP的数量取决于许多因素,变化很大。它不能代表样品中微生物的数量。因此,测量不确定度较高。

总ATP的测定:用破坏细胞的裂解缓冲液的生物发光法测定。细胞内ATP被释放,并与游离ATP相加。由于样品的体积通常较低(约100 μ l),生物膜碎片的存在对结果有很大影响。

因此,使用这种策略,细胞内ATP的测量是基于两个不确定测量值的相减,给出近似甚至错误的结果。

另一个问题在于ATP的测量是相对的。实际上,结果是由亮度计(RLU)给出的相对光单位。然而,在这种间接的方法中,测量是不标准化的。这取决于影响酶效率的许多参数(温度、裂解缓冲液的效果、杀菌剂……)。

从事定性度量只会导致重要的近似。甚至可以获得比总ATP更高的游离ATP量!

总之,用这种方法测量细胞内ATP是快速和简单的。然而,考虑到上述问题,结果可能会有偏差,因此难以解释。因此,必须谨慎处理数据,避免过度解释。

直接测定细胞内ATP

直接测量细胞内ATP还需要一个额外的步骤:在膜上过滤以消除游离ATP。事实上,由于这个分子非常小,它通过了膜,而微生物被保留了下来。

在这种方法中,保留在过滤器上的微生物被摧毁,以便释放细胞内ATP。它给出了样本中生物体的代表性观点。

此外,该策略的优点是分析具有代表性的样品体积(一般在10到50毫升之间)。

虽然需要更多的处理,但这种方法与标准化相结合,提供了更可靠的定量结果,在时间和空间上具有可比性。

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